引言

连续稀释，即通过恒定稀释因子逐步降低浓度，是应用于筛选相关领域（如药物研发中确定最低抑菌浓度（MIC）、微生物学中计算最可能数（MPN）及分子生物学中执行一般核酸定量分析）的常见方法。尽管连续稀释技术相当简单，但相互依赖的稀释步骤中若有液体处理不当，则会导致误差传递和累积。因此充分混合至关重要，但这会对拇指造成很大的负担，并可能引发重复性劳损伤害。此外，频繁执行连续稀释耗时较长。

本应用说明描述了使用ASSIST PLUS移液工作站上的VOYAGER可调吸头间距移液器进行连续稀释的最简方法，以获取更多全自动操作时间。本方案概述了水溶液稀释分析物时确保可靠结果的最佳设置。如需根据不同条件调整关键参数的更多信息，请参阅INTEGRA的连续稀释综合指南。

主要优势：

已验证的连续稀释方案与ASSIST PLUS上VOYAGER的最佳设置可确保移液与混合的均一性。
VOYAGER支持多种管和板的灵活自动连续稀释，并可在同一方案中无缝切换移液体积。
电子移液器可避免液体操作中的拇指劳损，与ASSIST PLUS配合使用则可实现危险样品的安全处理。
ASSIST PLUS为用户提供更多自动操作时间，减少耗时较长的手动操作。
此类高效液体处理方案支持2倍、5倍及10倍连续稀释，且动态混合体积可确保分析物的均质性。
VIALAB连续稀释方案包含针对难溶分析物的特定混合参数，可简化工作流程。

概述：如何使用ASSIST PLUS进行连续稀释

本应用说明演示了如何在ASSIST PLUS上使用8通道125 μl VOYAGER对水溶柠檬黄进行连续稀释。

实验装置

ASSIST PLUS配合8通道125 μl VOYAGER及125 μl无菌过滤器GRIPTIPS®吸头，通过一个3步程序（图1）实现全自动连续稀释：

转移稀释液至靶板
转移分析物至靶板
靶板内连续稀释分析物

图1：连续稀释实验装置

图2：连续稀释台面装置。位置A：源–双储液槽适配器（及2个10 ml储液槽）；A1为稀释液（蓝色），A2为分析物（绿色）。位置B：目标–96孔平底板（粉色）。位置C：空。

分步操作流程：

分析物的连续稀释

步骤：分析物的连续稀释。

操作方法：将INTEGRA双储液槽适配器（及2x10 ml储液槽）置于台面位置A，A1为稀释液（蓝色），A2为分析物（绿色）（图2）。将透明96 孔平底板（粉色）横向置于台面位置B（图2）。

选择并运行以下VIALAB程序之一：

2倍连续稀释→125_VOYAGER_2_倍_连续_稀释

5 倍连续稀释→125_VOYAGER_5_倍_连续_稀释

10倍连续稀释→125_VOYAGER_10_倍_连续_稀释

用VOYAGER处理指定体积（图3）。

通过多次分液将稀释液从储液槽（位置A–A1）转移至自第2列起的96孔平底板的各孔内（位置B）。为在孔板设置中确保精准性，10倍连续稀释使用转移体积的5%作为预分液和后分液，2倍和5倍连续稀释则使用10%。

图3：使用125 µl VOYAGER在96孔平底板中进行连续稀释

VOYAGER使用新的GRIPTIPS，从储液槽（位置A–A2）中吸取最高浓度的分析物，并将其分配至96孔平底板的第1列（位置B）。

在无需更换GRIPTIPS的情况下，VOYAGER通过以下流程开始连续稀释：从96孔平底板的第1列（位置B）吸取指定体积（图3）并将其分配至第2列。随后，VOYAGER以最大速度（10）混合100 µl（2倍与10倍连续稀释）或80 µl（5倍连续稀释）的分析物/稀释液5次。在吸取下一稀释步骤的液体前，执行排液操作，以清除吸头内的残留液体。此过程重复至第11列，将最后一次吸取的液体与GRIPTIPS一同丢弃（图4）。第12列仅含稀释液，作为去除背景噪声的空白对照。